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        固相萃取儀基本操作
        點擊次數:629 更新時間:2023-04-24

        固相萃取儀基本操作:

          1.活化

          萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤,因為填料干燥會降低樣品保留值,而各小柱的干燥程度不一,也會影響回收率的重現性。先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料,因為甲醇能潤濕吸附劑表面,并滲透到非極性的硅膠鍵合相中,使硅膠更容易被水潤濕;然后再加入水或緩沖液沖洗,創造和樣品溶劑相容的環境并提高回收率。

          2.上樣

         ?、儆?.1mol/L酸或堿調節,使pH=9,離心取上層液萃??;

         ?、谟眉状?、乙腈等沉淀蛋白質后取上清液,以水或緩沖液稀釋后萃??;

         ?、塾盟峄驘o機鹽沉淀蛋白質后取上清液,調節pH值后萃??;

         ?、艹?5min后加入水、緩沖液,取上清液萃取。流速應控制為1ml/min,流速快不利于待測物與固定相結合。

          3.淋洗

          反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液,可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積,而SPE濾膜為5-10ml。

          4.洗脫

          應選用5-10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度,則可先將洗脫液揮干后,再用流動相重組殘留物后進樣。體內樣品洗脫后多含有水,可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。


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